人原代肝细胞

产品说明书

该说明书方法适用于本公司提取的人原代肝细胞，  您使用时,  请按随货的说明书操作，如有任何疑问可咨询公司技术人员。仅用于科研使用，不得用于临床。

I 简介

我们的原代肝细胞分离自正规医院获取的人肝组 织， 所有材料来源清晰，病人或 者家属知情同意。 我们的细胞产品经过多种测试， 复 苏后细胞活力高 、极化（分化）形态明显， 可广泛应 用于基础生命 科学研究以及药物研发中。

II   试剂与材料

-人原代肝细胞

-复苏培养基

-纯化培养基（如需要，随细胞赠送）

-铺板培养基

-维持培养基

-胶原包被培养板

-无菌 15ml 离心管

-宽口移液枪头（普通移液枪头剪去尖头，再灭菌使用） -移液枪

-恒温水浴锅（37℃预热， 请用温度计校准）

-冷冻水平离心机（带水平转子，可离心 15ml 离心管）

-生物安全柜

-37oC/5%CO2  培养箱

III 悬浮细胞的复苏

1.      生物安全柜中， 将 10ml  复苏培养基（Cat#LV- Rec003）加入到 15ml  离心管中， 37℃恒温水浴锅 预热 20min，然后转移到生物安全柜中； 铺板培养 基 37℃预热。

2.     将冻存的肝细胞从冷藏位置迅速转移至 37℃恒温 水浴锅中，尽可能多的浸入 37℃水中，顺时针水平 摇动， 但必须确保冻存管管盖保持在水面以上。

3.     解冻冻存管约 90 ~ 120s ，至冻存管中只有小块碎冰 漂浮即可。

4.    用 75%酒精消毒冻存管， 并将其转移到生物安全柜。

5.     用宽口枪头将细胞吸出，并以滴加方式转移至含已 预热的复苏培养基的离心管中（注意：  冻存管与枪

头上残留细胞，可吸取 1ml复苏培养基清洗冻存管

与枪头并将其混入离心管的培养基中），轻微上下 颠倒离心管 2-3 次混匀。

6.     可直接低速离心（离心对细胞活力有一定的影响）， 50×g，常温离心 5min 。去上清，用药物代谢专用培 养基（LV-WEM011 或者客户自备） 重悬，用台盼 蓝排除法（血球计数板手工计数，  勿用细胞计数仪） 测定肝细胞的活力、活细胞数。按照实验要求加入  药物， 测定药物代谢情况。

IV 贴壁细胞的复苏

1.   生物安全柜中，将 10ml 复苏培养基（Cat#LV-Rec001） 加入到 15ml 离心管中，37℃恒温水浴锅预热20min ， 然后转移到生物安全柜中；铺板培养基 37℃预热。

2.    将冻存的肝细胞从冷藏位置迅速转移至37℃恒温水 浴锅中。尽可能多的浸入 37℃水中， 顺时针旋转解 冻，但必须确保冻存管管盖保持在水面以上。

3.   解冻冻存管约 90-120S，至冻存管中只有小块碎冰漂 浮即可。

4.    用 75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。

5.    用宽口枪头将细胞吸出，并以滴加方式转移至含有 10ml 预热的复苏培养基的 15ml  离心管中（注意：

冻存管与枪头上残留细胞，   可吸取 1ml复苏培养基

清洗冻存管与枪头并将其混入离心管的培养基中）， 轻微上下颠倒 2-3 次混匀。

6.    用台盼蓝排除法（血球计数板手工计数，勿用细胞 计数仪）测定肝细胞的存活率和细胞总量， 建议检 测 3 次，求取平均值。

7.   步骤 6 所得细胞得到的细胞， 严格按照具体实验用

途选择合适的处理方式。

7. 1 细胞悬液可直接铺板（细胞得率最大）

按照 1.8~2.0×105cells/cm2 接种到胶原包被培养板中， 摇匀， 置 37oC/5%CO2 培养箱中培养。细胞培养 2 小  时，细胞处于半贴壁状态，轻轻去掉培养基和未贴  壁细胞，轻轻沿着壁加入铺板培养基， 继续培养 24   小时。