ZR-75-30 人乳腺癌细胞 (STR鉴定正确)

ZR-75-30源自一位47岁女性黑人更年期侵入性导管癌患者的腹水。 细胞定性为人，非-HeLa，恶性乳房上皮癌起始。

细胞特性

1） 来源：女 乳腺；乳房；上皮；导管癌腹水转移灶  

2） 形态： 上皮细胞样，贴壁细胞

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1）收到细胞后先不开瓶盖 ，请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的 细胞名称一致之后用75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约1-2h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。之后请尽 快传代培养。如果当天无法操作 ，请常温 （ 约 25。C） 放置 ，第二天需及时操作 。

3）收到细胞后若发现存在细胞脱落现象：请将培养瓶中所有培养液收集至离心 管，离心 （ lOOOrpm , 5min ） ，弃上清，加 lml 的 0.25%胰酶于离心管中 ，轻轻吹 打，重悬，作用 10 分钟后，加 3-6mL 完全培养基中止反应 。再离心，去上清， 加 1-3mL 完全培养基重悬 。仍然贴壁的细胞，按照以上描述的常规方法加入胰酶消化。最后将消化好的脱落细胞和贴壁细胞混合 ，按比例接种到新的 T25 培 养瓶中即可 。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备1640 基础培养基，优质胎牛血清20 %， P/S ，1%

备注：ZR-75-30 细胞长的比较慢，约 10-14 天才能长满，可 2 天换一次液。 该细胞对血清质量较为敏感 ，我库建议您使用进口的优质胎牛血清进行培养或选择订购我库细胞专用培养基进行培养。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存细胞：冻存细胞时，用FBS重悬细胞，然后加入一定量的DMSO，轻轻混合均匀后移入到冻存管中，DMSO终浓度为10%。

二．细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。