OVCAR-8/ADR 人卵巢癌腺癌阿霉素耐药细胞

OVCAR-8/ADR为由OVCAR-8细胞构建的耐ADR药物细胞株。

细胞特性

1） 来源：高级别卵巢浆液性腺癌  女  64岁

2） 形态：上皮细胞样  贴壁生长

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1.  收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞有污染；或冻存管有破损，融化、漏液等，请立即拍照并联系我们。照片包括细胞培养瓶/冻存管外观，显微镜下细胞照片（100倍，200倍各2张）；

2.若收到的复苏细胞有少量细胞脱落、飘起，可能由于运输途中导致。请先于37℃恒温细胞培养箱中静置2~3h后，再进行处理；

复苏细胞的充液培养基为不含药物的维持培养基，血清浓度较低，收到细胞后请及时更换为完全培养基；

3.建议收到细胞后，首先进行扩增（至少3代），并冻存部分细胞以备用。

4.初次培养，当细胞汇合度达约80%时，可加入400ng/mL ADR的完全培养基培养至细胞完全融合后传代。细胞传代1~2次后仍能保持增殖，即可提高药物浓度至最大500ng/mL继续培养；若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首次降低一半药物浓度）或使用不含药物的完全培养基培养，至细胞汇合度达80%左右，且生长状态较好时，再更换为所需的ADR药物浓度。

5.细胞冻存过程中，不可添加药物。

6.备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。                  

一．培养基及培养冻存条件准备

1.  准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%

  细胞培养试剂的配制

1）ADR药物的配制及保存

建议将ADR药物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR药物，使其完全溶解后，使用0.22um滤器过滤除菌。

注意：可根据用量配置药物，并将药物分装保存，避免反复冻融导致药物失效。溶解后的Taxol，4℃保存1周，-20℃保存1个月，-80℃保存6个月。

2）冻存液的配制

90%优质胎牛血清+10%DMSO，现用现配。（冻存液中不含药物）

3）完全培养基的配制

2  培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3  冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

细胞处理

1）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

注意：①细胞复苏过程中，不可使用含有药物的培养基。须在细胞生长至汇合度达80%左右时，方可添加400ng/mL ADR药物；若细胞生长状态较为缓慢，可适当降低ADR的浓度（首次降低一半药物浓度），或使用不含药物的完全培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的ADR浓度。

②建议复苏细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸，造成人员伤害。

2）细胞传代（建议以同等底面积的培养瓶/皿按照1：2比例传代）

①待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养。

②弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次，吸净残余的PBS。

③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化2~5min，显微镜下观察细胞细胞大部分变圆并脱落，即可轻拍培养瓶至细胞全部脱落。迅速拿回操作台，加入2倍体积的、含10%FBS的培养基中止消化。 

④将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min离心5min，弃去上清液。

⑤向细胞沉淀中加入1~2mL完全培养基重悬细胞，轻吹混匀。将细胞悬液按1：1的比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中，添加6~8mL完全培养基。

注意：细胞传代1~2次后仍能保持增殖，即可提高药物浓度至500ng/mL继续培养；若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首次降低一半药物浓度）或使用不含药物的完全培养基培养，至细胞汇合度约80%，且生长状态较好时，再更换为所需的ADR药物浓度。

3）细胞冻存

①细胞冻存时，步骤同2）细胞传代的①~④，细胞计数后，加入配制好的细胞冻存液，重悬细胞，按照1×106 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

注意：细胞冻存过程中，不可添加药物。

②将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项

1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。