HEP-53.4 小鼠肝癌细胞

来源于 C57BL/6J 小鼠的原发性肝细胞癌。这些小鼠肝细胞忠实地代表了肝细胞癌，并为研究这种类型的肝癌提供了有价值的模型。同义词 HEP-53.4 和 53.4，它们便于识别和交叉引用。肝细胞癌是一个重大的健康问题，这些细胞能够对其分子通路、细胞相互作用和治疗策略进行精确研究。这些细胞起源于 Mus musculus（小鼠），为理解和开发肝细胞癌的治疗方法提供了相关的模型系统。https://cls.shop/Hep-53.4/400200
细胞特性
形态：上皮样细胞 贴壁生长.
用途：仅供科研使用。
培养条件：
1）准备 DMEM（含 NaHCO3 1.5g/L）+FBS 10% + P/S 1 %

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%
注意:该细胞在 DMEM(含 1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的 DMEM 含有较高浓度的 NaHCO3（3.7g/L），若使用 DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高 CO2 浓度（7%-10%）。

1.常规消化收集细胞离心 2.离心后去掉离心管内上清，加入 1ml 左右胰酶重悬细胞混匀，建议轻轻晃动或者轻轻吹打细胞， 放入培养箱消化细胞，再消化 1min 左右。 3. 消化好后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，迅速加入 3-5ml 含血清的培养基混匀以终止消化，离心去除胰酶 4. 加入 5ml 左右的细胞相应的完全培养基混匀，按比例接入培养瓶/皿中 5.显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单细胞，若有少量成团的小细胞团可不用重新消化，使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。

贴壁细胞参考：

一.消毒静置等细胞稳定后拍照 100X 和 200X。弃去培养上清，用 PBS 润洗细胞 1-2 次并吸走。

二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培养瓶中震荡混匀，如果属于贴壁不牢固的细胞很容易脱落的就培养箱外面消化震荡待脱落 90%以上终止消化，一般小于 1 分钟以内，甚至不加胰酶有部分贴壁非常不牢固的细胞也会自然震荡脱落。如果是贴壁牢固的细胞则置于 37℃培养箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培养箱震荡帮助细胞脱落，如脱落 90%以上则对应 3-6ml 含有 10%血清的完全培养基终止彻底，以防胰酶残留损伤细胞。如

果贴壁非常牢固的细胞，脱落的比例比较低，也不超过 2 分钟后终止消化彻底，再加入 1ml 完全培养基让细胞缓冲后再过 2 分钟进行二次消化，反复分步消化以降低单次消化时长，减少刺激，保护细胞膜。或采用刮产刮细胞的方式处理也可以。总归原则是达到消化目的的同时减少细胞膜受到的损伤越小越好。

三.消化完成后轻轻吹匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培养皿中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2 和以上比例进行，具体以实际细胞密度决定。期间多的细胞一定保存多份细胞冻存管备种