AsPC-1+LUC 人转移胰腺腺癌细胞

细胞鉴定: STR 鉴定已通过

细胞来源 :国家资源库

细胞背景: Chen 等人于 1982 年用一名患有胰腺癌的 62 岁女性白种人患者腹水中的细胞移植到裸鼠后建

立。可以表达 CEA，人胰腺相关抗原、人胰腺特异性抗原和黏蛋白。

https://www.atcc.org/products/crl-1682

https://www.addexbio.com/productdetail?pid=5061

细胞特性 形态：上皮细胞样，贴壁生长

用途：仅供科研使用。

培养条件 1） 准备 RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。注意事项 该细胞为稳定转染 Luc 的细胞，随细胞传代次数的增加，其 Luc 荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。

建议收到细胞后至少传 3 代，冻存留种后再进行筛选。

初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为 1ug/ml 嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂 浮或者漂浮较少，即可更换为含 2ug/ml 嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药 物浓度为 5ug/ml。若筛选过程中，漂浮细胞大于 60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约 80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入 5ug/ml 嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。

常温发货：收到后 T25 瓶消毒再放置培养箱静置 2-3 小时后观察密度和状态拍照 2-3 张反馈给销

售，密度达标就可以传代。前期传代比例 1:2，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成 1 个 1ml 冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存 2-3 只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。

干冰发货：常规细胞发货冻存管 2 只，复苏 1 只，另外一只备用，第一个复苏不成功时严格按照 厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。

贴壁细胞参考：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置 于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培养皿中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的 完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配

制的完全培养基来培养细胞。

悬浮细胞参考：

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况 下细胞密度维持在 1×105~1×106 个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中 1000rpm，离心 5min，弃去上清，补加 1-2mL 培养液 后重悬混匀后将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:4 的比例进行。

运输形式 低温：（1）1mL 冻存管包装干冰运输，收到后-80 度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发 现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温: （2） T25 瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

生物安全 1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护， 所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮 中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖 子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。