MN9D 小鼠中脑多巴胺能神经元细胞

N18TG2与来自14日龄C57BL / 6J小鼠胚胎的喙中脑神经元融合而建立的细胞。是一种永生化的含多巴胺的神经元杂交细胞系。当MN9D细胞与视顶（一个不接受多巴胺能神经支配的大脑区域）的原代胚胎细胞共聚时，它们的多巴胺含量，酪氨酸羟化酶免疫反应性和酪氨酸羟化酶mRNA显着降低。通过与胚胎丘脑的细胞共聚集产生了多巴胺含量的类似降低，胚胎丘脑是另一个没有多巴胺能神经支配的大脑区域。MN9D细胞与来自纹状体或皮层的多巴胺感受细胞的共聚集对MN9D细胞的多巴胺含量没有明显的刺激作用。视顶细胞产生的MN9D多巴胺含量的降低并没有通过添加纹状体细胞来逆转。因此，MN9D杂交细胞能够对来自大脑区域的细胞的抑制因子做出反应，这些细胞不是多巴胺能神经元的靶标。产生儿茶酚胺的PC12细胞没有以类似的方式反应，这表明MN9D细胞的反应是其中脑起源的功能。鉴于MN9D细胞对不同脑细胞群的选择性反应，这种杂交细胞系应有助于研究中枢神经系统中的细胞 - 细胞相互作用，这些相互作用可能参与神经递质表型的表达和特定神经元连接的建立。

1）形态：上皮细胞样，贴壁生长
2） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

一．培养基及培养冻存条件准备

1）准备1640培养基，优质胎牛血清10%；P/S 1%.

 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。