SU-DHL-6 人弥漫性大 B 细胞淋巴瘤细胞（STR 鉴定）

 细胞来源：国家资源库

l 细胞背景：从一名患有B 细胞非霍奇金淋巴瘤 (B-NHL)的43岁白人男性的腹腔积液中建立，当时被描述为弥漫性混合的小细胞和大细胞类型；细胞系携带 EZH2 Y641N 突变；分配给 GCB 样 淋巴瘤亚型（生发中心 B 细胞）。EB 病毒阴性，具有 t(14；18)易位。基因表达：单克隆细 胞质免疫球蛋白：IgM，λ轻链。所有 DHL 细胞系均对 Epstein-Barr 病毒 (EBV) 基因组的 存在呈阴性。并在其可能是染色体间断点的重链基因位点内表现出意想不到的重组。t(14;18) 易位将截短的 bcl-2 基因与 J6 并列在尾对头结构中。 改变的 bcl-2 基因的失调表达可能在滤泡性 B 细胞淋巴瘤的无序生长和分化中起关键作用。
https://www.atcc.org/Products/CRL-2959

https://www.dsmz.de/collection/catalogue/details/culture/ACC-572

l细胞特性：
1） 来源：淋巴瘤患者胸腔积液

2） 形态：圆形淋巴细胞单独或成团悬浮生长

3） 含量：>1x106 细胞数

4） 规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。               

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）  RPMI1640培养基+10%FBS优质胎牛血清+1%P/S双抗

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在 1×105~1×106 个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中 1000rpm，离心 5min，弃去上清，补加1-2mL 培养液后重悬混匀后将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。

二． 细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。