一、前期准备
设备与环境
操作需在无菌间进行,使用生物安全柜确保洁净环境,操作台提前紫外灭菌30分钟以上123。
准备水浴锅、无菌PETG瓶或离心管(根据用量选择规格)、无菌移液管等工具,分装容器需专用且严格区分清洗(如血清类制品用具不可与其他制品混用)410。
个人防护
工作人员需穿戴实验服、一次性手套、口罩和帽子,操作中避免裸露皮肤接触操作台13。
血清解冻
若血清冷冻,需逐步解冻:从-20℃转移至4℃冰箱完全溶解,再恢复至室温,过程中需定期摇晃均匀以避免沉淀形成1510。
二、分装操作步骤
混匀血清
分装前上下颠倒混匀数次,避免剧烈摇晃产生气泡13。
无菌分装
在生物安全柜内操作,用无菌移液管将血清分装至离心管或PETG瓶中,沿管壁缓慢注入,避免气泡。装量不超过容器的80%,预留膨胀空间110。
分装过程中需快速操作,避免沉降菌污染,瓶口和工具需用酒精灯火焰短暂灼烧灭菌10。
封口与标记
分装后立即用封口膜密封,标注分装日期、批次、品名等信息1310。
保存
分装后的血清置于-20℃保存,保质期可达5年,但建议2年内使用以获得最佳效果。避免使用-50℃以下保存,因可能增加沉淀风险156。
三、注意事项
避免反复冻融
反复冻融会破坏血清营养成分,建议按需分装,减少解冻次数168。
沉淀处理
若出现纤维蛋白或脂蛋白沉淀,可通过离心(400g,1-2分钟)去除或静置后转移上清液。37℃加热并摇晃可溶解大部分沉淀569。
无菌操作
全程需严格无菌操作,分装用具不可混用,不同批次制品不得连续使用同一套工具410。
热灭活的必要性
热灭活(56℃,30分钟)仅适用于特定实验(如免疫学研究),常规培养无需此步骤,否则易增加沉淀并破坏生长因子689。
人员健康要求
分装人员需每年体检,患活动性结核、肝炎等传染病者禁止操作4。
四、常见问题解答
分装后血清颜色差异:因血红蛋白含量不同,属正常现象,不影响质量9。
培养基保存:添加血清和抗生素的培养基需在2-3周内使用,以防成分降解8。
黑点污染判断:若细胞生长状态正常,黑点可能为细胞残骸或血清沉淀,非微生物污染69。
通过以上规范操作,可有效保障血清的活性与稳定性,减少污染和成分损失。更多细节可参考相关操作指南或企业标准文件。