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牙周膜干细胞（PDLSCs）原代培养的传代时机对细胞状态和实验成功至关重要。以下是判断传代时机的关键点：
1. 细胞密度
最佳密度：细胞覆盖培养皿底部的70-80%时传代，避免过度生长导致接触抑制或分化。
过低密度：细胞密度过低时传代可能影响增殖和存活。
2. 细胞形态
典型形态：PDLSCs呈长梭形或成纤维细胞样，排列有序。
异常形态：出现形态异常或分化迹象时应尽快传代。
3. 细胞活力
高活力：细胞活力高、增殖活跃时适合传代。
低活力：活力下降或出现大量死细胞时需尽快传代。
4. 培养基状态
培养基颜色：培养基变黄（pH下降）时需更换或传代。
代谢废物：代谢废物积累可能抑制细胞生长，需及时传代。
5. 传代步骤
消化时间：使用胰酶消化，时间控制在2-5分钟，避免过度消化。
终止消化：加入含血清的培养基终止消化。
离心收集：离心后弃上清，用新鲜培养基重悬细胞。
接种密度：按适当密度（如5x10^3 - 1x10^4 cells/cm²）接种到新培养皿。
6. 记录与监控
详细记录：记录传代日期、细胞密度、形态等信息。
定期观察：每天观察细胞状态，及时调整培养条件。
7. 注意事项
避免过度传代：过度传代可能导致细胞老化或分化，通常控制在10代以内。
无菌操作：严格无菌操作，防止污染。
通过以上方法，可以确保PDLSCs在最佳状态下传代，维持其干性和增殖能力。
