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常用的培养基耗材和细胞接种量在细胞培养实验中，选择合适的培养基、耗材以及优化细胞接种量是确保实验成功的关键因素。以下是常用培养基、耗材及细胞接种量的总结，适用于常规细胞系（如肿瘤细胞、干细胞等）。
一、常用培养基
1. 基础培养基
不同细胞系对培养基成分需求不同，以下是常见类型：
| 培养基类型 | 适用细胞 | 特点 |
|---|---|---|
| DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) | HeLa、HEK293、MCF-7、HepG2 | 高糖（4.5 g/L）适用于快速增殖细胞，低糖（1 g/L）适用于某些干细胞 |
| RPMI-1640 | Jurkat、K562、A549、PBMCs | 适合悬浮细胞和部分贴壁肿瘤细胞 |
| MEM (Minimum Essential Medium) | Vero、BHK-21、NIH/3T3 | 成分简单，适用于多种哺乳动物细胞 |
| DMEM/F12 | 干细胞（如MSCs）、原代细胞 | 含更多营养成分，适合难培养细胞 |
| α-MEM | 骨髓间充质干细胞（BMSCs）、成骨细胞 | 含核苷酸和维生素，促进干细胞生长 |
| IMDM (Iscove’s Modified DMEM) | 杂交瘤细胞、造血干细胞 | 含额外氨基酸和硒，适合高密度培养 |
2. 补充成分
血清：
胎牛血清（FBS/FCS）：常用浓度 5–20%（干细胞需10–20%）
无血清培养基（SFM）：如 StemPro®、KOSR（用于iPSCs）
生长因子/添加剂：
EGF、bFGF（用于干细胞）
胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）（无血清培养）
青霉素/链霉素（P/S）（1%浓度防污染）
二、常用细胞培养耗材
1. 培养容器选择
| 耗材类型 | 适用场景 | 推荐接种面积 |
|---|---|---|
| 96孔板 | 高通量筛选（MTT、CCK-8） | 100–200 µL/孔（5,000–10,000 细胞/孔） |
| 24孔板 | 细胞迁移（Transwell）、免疫荧光 | 500 µL/孔（2–5×10⁴ 细胞/孔） |
| 6孔板 | 细胞传代、Western Blot、qPCR | 2 mL/孔（1–2×10⁵ 细胞/孔） |
| T25培养瓶 | 常规扩增 | 5 mL（5×10⁵ 细胞） |
| T75培养瓶 | 大规模培养 | 15 mL（1.5–2×10⁶ 细胞） |
| 培养皿（35/60/100 mm） | 克隆形成、细胞成像 | 2/4/10 mL（根据面积调整） |
2. 其他关键耗材
移液管（1/5/10/25 mL）
细胞冻存管（1.8/2 mL）（冻存液：90% FBS + 10% DMSO）
离心管（15/50 mL）
滤器（0.22 µm）（用于培养基除菌）
冻存盒（程序降温盒）
三、细胞接种量指南
细胞接种量取决于细胞类型、实验目的和培养时间，以下为常见参考：
1. 常规贴壁细胞（如HeLa、HepG2）
| 培养容器 | 推荐接种量 | 培养时间 |
|---|---|---|
| 96孔板 | 5,000–10,000 细胞/孔 | 24–72 h（增殖实验） |
| 24孔板 | 2–5×10⁴ 细胞/孔 | 48–72 h |
| 6孔板 | 1–2×10⁵ 细胞/孔 | 48–72 h |
| T25瓶 | 5×10⁵ 细胞 | 2–3天传代 |
| T75瓶 | 1.5–2×10⁶ 细胞 | 3–4天传代 |
2. 悬浮细胞（如Jurkat、K562）
起始密度：2–5×10⁵ 细胞/mL
维持密度：1–2×10⁶ 细胞/mL（过高会抑制生长）
3. 干细胞（如MSCs、iPSCs）
MSCs（骨髓间充质干细胞）：
T25瓶：2–3×10⁵ 细胞（避免过度融合）
iPSCs/ESCs：
6孔板：0.5–1×10⁵ 细胞/孔（需Matrigel包被）
四、注意事项
细胞状态影响接种量：
原代细胞生长慢，接种量可提高20–30%。
肿瘤细胞（如A549）增殖快，需降低接种量以防过快耗尽营养。
实验目的调整：
迁移实验（Transwell）：低密度（1×10⁴ 细胞/孔）。
克隆形成实验：极低密度（200–500 细胞/6孔板）。
无血清培养：细胞贴壁能力下降，可增加接种量20%。
五、总结
培养基选择：根据细胞类型（如DMEM用于HeLa，α-MEM用于MSCs）。
耗材匹配实验需求：96孔板适合高通量，6孔板适合蛋白检测。
接种量优化：参考标准值，结合细胞生长曲线调整。
正确选择培养基、耗材和接种量可显著提高实验可重复性！
