师姐教你细胞培养中常见的细胞污染类型及预防办法

在细胞培养过程中，细胞污染是常见但严重影响实验结果的难题。以下是常见的污染类型、识别方法及预防措施，师姐来帮你避坑！

一、常见污染类型及识别

1. 细菌污染

• 表现：培养液短期内变浑浊（24-48小时），pH骤降（变黄），镜下可见大量细小颗粒状或杆状/球状微生物游动。

• 高发原因：操作台消毒不彻底、移液枪污染、手部接触瓶口等。

2. 真菌污染（霉菌/酵母菌）

• 表现：培养液清亮但漂浮白色/浅黄色菌团（肉眼可见），pH变化较慢，镜下可见菌丝或卵圆形酵母细胞。

• 高发原因：实验室环境潮湿、超净台滤膜失效、培养箱清洁不足。

3. 支原体污染

• 隐形杀手：培养液无肉眼变化，但细胞状态变差（生长缓慢、贴壁性下降）。需PCR或荧光染色（如Hoechst 33258）检测。

• 传播途径：血清污染、交叉污染、操作者口鼻分泌物。

4. 黑胶虫污染

• 争议性污染：培养液中有黑色/棕色微粒，可运动，但无明确病原体鉴定结果。可能与血清中的杂质或微生物代谢产物有关。

5. 交叉污染

• 细胞系被其他细胞取代：如HeLa细胞污染其他细胞系。需STR鉴定确认。

二、预防污染的关键措施

1. 严格无菌操作

• 实验前用75%酒精擦拭超净台、移液枪及手部。

• 瓶口过火焰灭菌（避免残留酒精爆炸），移液时避免触碰管口。

• 使用一次性无菌耗材（枪头、离心管等）。

2. 定期环境监控

• 每月对培养箱、超净台进行消毒（如铜离子水擦拭、紫外照射30分钟以上）。

• 更换水盘中的水并添加抑菌剂（如硫酸铜）。

3. 血清和试剂选择

• 选用支原体检测阴性的血清（如Gibco、HyClone等品牌），必要时过滤除菌。

• 培养基中加入抗生素（如青霉素-链霉素双抗），但避免长期使用以防掩盖污染。

4. 细胞操作规范

• 不同细胞系分开操作，避免共用培养基或胰酶。

• 定期检测支原体（每1-2个月），新细胞系需先隔离培养确认无污染。

5. 污染应急处理

• 发现污染后立即隔离该批次细胞，彻底消毒实验器材。

• 珍贵细胞可尝试抗生素冲洗（如支原体清除剂Plasmocin），但成功率有限，建议重新冻存。

三、师姐的经验贴士

• “慢即是快”：操作时动作轻柔规范，比匆忙实验更省时间。

• “疑罪从有”：对可疑污染宁肯丢弃，避免污染扩散。

• “定期备份”：重要细胞定期冻存，分装至不同液氮罐以防意外。

记住：污染防控的核心是细节！ 养成良好的操作习惯，你的细胞才能健康成长～如果遇到具体问题，欢迎随时找师姐讨论！