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将冻存在-196°C液氮中的细胞快速融化至37°C,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。
细胞的复苏实验步骤操作如下:
1.根据细胞冻存记录取出需要复苏的细胞。
2.将冻存管投入到已经预热的金属浴/水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。
3.约1-2min后冻存管内液体完全溶解(一般细胞冻存量为1ml),将细胞悬液转移到装有约10ml已预热的含血清完全培养液离心管中(目的:稀释去除冻存液中的DMS0),取出放入离心机中以1000rpm/min速度离心3~5min。
4.用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。吸弃上清液,向离心管内加入1ml培养液,吹打制成细胞悬液。
5.将细胞悬液分装入培养瓶或者培养皿内,将培养瓶/培养皿放入37C,5%CO2的培养箱内过夜后换液继续培养,换液的时间由细胞情况而定。
细胞复苏注意事项：
1、整个复苏过程要尽量快，溶解时间太长可能影响复苏效果；
2、已溶解的冻存细胞尽量短时间的在常温存放，尽快稀释或者离心去除DMSO；
3、由于“化冰”这一步里冻存管与水温差太大，尤其是液氮里拿出来的冻存管，放到水里可能会造成翻江倒海的既视感，所以可以用镊子夹住冻存管往水里摁，这样即使有炸裂的情况也会有水做缓冲；
4、取冻存管时要谨防冻伤，尤其是夏天，尽管热也最好穿长袖白大褂；
5、离心这一步也可以在冻存管里的冰融化后直接进行，也就是直接把冻存管离心，离心后弃去原来的冻存液，然后直接加完全培养基重悬细胞，接着把细胞转到培养皿/瓶里培养。这种方法也许不能将DMSO清除得很干净，但是基本影响不大；
6、 复苏第二天记得去看看细胞，如果状态还不错的话就说明复苏成功。
