细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。既可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,又起到了细胞保种的作用。那么你知道细胞冻存的注意事项有什么吗?让我们一起来看看吧!
细胞冻存注意事项:
将冻存管放入梯度冻存盒然后保存至-80℃过夜(如果没有冻存盒,可以先在4℃冰箱放置30 min,然后转移至-20°℃放置1-2 h,最后转移至-80°℃过
夜),第二天取出放入液氮罐,并记录好位置信息。
在冻存细胞操作时,请佩戴防护眼镜和手套,以免受到液氮的冻伤;
务必拧紧冻存管的盖子,以免在复苏过程中渗水,导致支原体污染;
定期检查液氮储备,确保所有细胞浸没在液体之下;
在每个冻存管上标明细胞的名称和冻存时间,并记录在册,以避免取错细胞或找不到冻存管的情况发生;
在-20°C的冰箱中将细胞放置的时间不应超过1小时,以防止冰晶过大而损坏细胞。
DMSO的作用是取代细胞中的一些水,以防止冰晶形成,刺穿细胞。
DMSO还能防止细胞在冷冻期间发生收缩,而后在解冻时又变得肿胀。
细胞冻存液一般有两种配置方法:
1.培养基:血清:DMSO=7:2:1
2.血清:DMSO=9:1