“黑胶虫”及其分解复合物是一种常见的细胞污染物,与细胞共生,随细胞传代而传代,通常抗生素对其无效。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,对细胞生长不利,严重时导致细胞死亡。
如果符合以下几个条件,基本可以确诊“黑胶虫污染”:
黑胶虫污染后培养液颜色不变化,也不浑浊;
显微镜下观察细胞间隙存在黑色异物;
黑色异物可能是点状或杆状的等;
与细胞生长呈现出“此起彼伏”的状态;
换液清洗无效;
培养液不浑浊,但在显微镜下观察细胞时,细胞周围和培养液中有很多“小黑点”,且随着培养时间的延长,“小黑点”逐渐增多,更换培养液或洗涤细胞不能将其去除;
细胞营养消耗快,需要频繁更换培养液;
细胞生长缓慢,细胞状态差,空泡化严重,甚至还可能出现细胞形态的改变。
# 处理方法 #
若细胞状态太差,建议最好直接丢弃,另外对培养箱做由里至外的清洁处理;
若细胞状态尚可,那么在确定对细胞的基因及蛋白表达没有影响的情况下,可以对应使用支原体清除试剂或“黑胶虫”清除试剂,培养2-3代可转阴。
一般的血清都不要去灭活处理
为什么呢?
因为经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。
而经过热灭活的血清,沉淀物的形成会显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。除非是在做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,才推荐做热灭活。所以在不是做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞培养时,血清尽量不经热灭活。