细胞支原体污染，据说只有一次和无数次

支原体污染是细胞培养领域的一个普遍性问题，实验室细胞系支原体污染的平均比例60%甚至更高，直径约为0.1-0.3um，且具有变形能力，可透过常见的过滤头，因此常规的过滤除菌的方法不能将其去除，细胞常用的抗生素也对支原体无效。支原体可通过同一个细胞培养箱细胞系之间交叉污染，无法通过常规的光学显微镜观察到，不会引起培养基混浊,因此细胞被支原体污染一般难以察觉。支原体会消耗必须氨基酸，影响细胞生长速率，促进代谢物积累，改变细胞形态，影响DNA/RNA、蛋白质的合成，抑制细胞因子表达，改变被污染细胞的基因表达谱，诱导染色体畸变。

一.支原体污染：微小却威力大

支原体，一种极其微小的原核生物，堪称细胞培养界的“隐形杀手”，因其体积微小，能轻易穿透常规滤膜和抗生素屏障，成为细胞培养中最棘手的污染源之一。

常规显微镜下难以捕捉其踪迹(可通过电镜观察到)，但其存在会悄无声息地改变细胞的生长参数、代谢速率乃至研究数据的准确性。受污染的细胞可能会出现生长迟缓、形态异常、甚至死亡，严重影响实验结果的可靠性。

支原体污染的特征

Ø 细胞增殖速度减缓、上清液依然清澈、大多数背景干净，但细胞形态可能出现异常，如拉丝、铺展等现象。

Ø 晚期支原体污染会导致细胞培养基变酸性，但通常没有明显的迹象表明培养物受到污染。

Ø 哺乳动物细胞培养物的特征：在污染的早期阶段，支原体通常不会引起培养基的pH值变化，也不会对哺乳动物细胞产生显著的毒性影响。支原体的生长主要与哺乳动物的细胞膜有关。在许多情况下，没有支原体污染的迹象，然而，支原体可引起细胞生长特性的变化、细胞代谢的抑制、核酸合成的破坏、染色体畸变、细胞膜抗原性的变化，并可改变转染率和病毒可接受性。

Ø 这些“微小盗贼”通过吸取细胞营养，导致细胞生长受阻，形态异常、甚至死亡，严重影响实验结果的可靠性。

常见原因

支原体污染往往源自污染的培养基、血清或是实验室环境中的空气传播。

鉴定方法

PCR法、显色法、荧光染色法等。

处理方法

若细胞污染后状态尚可，添加支原体抑制剂培养2-3代可转阴；若细胞污染后状态很差，建议消杀后丢弃。

注：细胞支原体污染通常不会在显微镜下观察到明显的小黑点，小黑点在显微镜下观察到可能是其他类型的污染，如真菌、黑胶虫或灰尘颗粒等。

二.黑胶虫污染：神秘的污染谜团

黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，迄今没有定论。有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中原虫或蛋白结晶。这种污染会导致细胞营养消耗加速，生长速度减缓，严重时还会引发细胞凋亡和坏死。更令人头疼的是，黑胶虫往往随细胞传代而传递，常规的抗生素治疗对它几乎无效。