杭州洵和生物科技有限公司
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培养条件：永生化人卵巢癌成纤维细胞专用完全培养基
卵巢是雌性动物的生殖器官。卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢左右各一，灰红色，质较韧硬，呈扁平的椭圆形，表面凸隆，幼女者表面平滑，性成熟后，由于卵泡的膨大和排卵后结瘢，致使其表面往往凹凸不平。
卵巢癌的治疗方式取决于患者年龄，是否恶性，癌变的部位，体积，大小，生长速度，是否保留生育功能以及患者的主观愿望等因素而定。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。
注意事项：收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。
细胞特性
1)细胞来源于手术切除的卵巢癌组织。
2)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
3)细胞生长方式：不规则细胞，贴壁培养。
细胞形态
| 人卵巢癌成纤维细胞分离自患有卵巢癌组织的病人；乳腺位于皮下浅筋膜的浅层与深层之间。浅筋膜伸向乳腺组织内形成条索状的小叶间隔，一端连于胸肌筋膜，另一端连于皮肤，将乳腺腺体固定在胸部的皮下组织之中。乳腺是哺乳动物少数可以重复经历生长、功能分化和退化过程的器官之一。纤维结缔组织伸入乳腺组织之间，形成许多间隔，这些纤维结缔组织对乳房起固定作用，而纤维结缔组织是由成纤维细胞构成的。 |
推荐培养基
我们推荐使用原代成纤维细胞培养体系）作为体外培养人卵巢癌相关成纤维细胞永生化细胞的培养基。
名称 体积 浓度 保存条件
原代成纤维细胞基础培养基 500ml 1× 4℃、避光
原代成纤维细胞培养添加剂 5ml 100× -20℃、避光
胎牛血清（FBS） 50ml 终浓度10% -20℃、避光
双抗（青霉素/链霉素，P/S） 5ml 100× -20℃、避光
产品的运输和保存
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁
细胞复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
| 细胞传代步骤 | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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注意事项
1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。
3、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
