XL-10-Gold化学感受态的资料及使用方法

   XL-10-Gold是目前转化效率高的感受态细胞，可用于大质粒或珍贵连接产物转化或构建文库。XL-10-Gold菌株为Hte (high transformation efficiency)基因型，是可特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型，已成功应用于40 kb质粒的构建。XL-10-Gold几乎缺失了所有已知的限制酶切系统，同时缺失了核酸内切酶(endA)，因此可以提高质粒DNA的产量和质量。

 同时，重组酶缺陷型(recA)减少了插入片段的同源重组概率，保证了质粒的稳定性。菌株带有四环素和氯霉素抗性，并可用于蓝、白斑筛选实验。经pUC19质粒转化检测，XL-10-Gold感受态细胞的转化效率可达108 cfu/μg DNA以上。

XL-10-Gold化学感受态产品组成

存储条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒DNA残留；

化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。

XL-10-Gold化学感受态使用方法

1.将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰浴中融化；

2.将待转化DNA加入到100μL感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30 min；

3.将离心管置于42℃水浴锅中，不要晃动，热激90 s后，立刻置于冰水浴中静置2-3 min；

4.向离心管中加入900μL LB或SOC培养基（室温或37℃预热），然后置于37℃摇床复壮45 min；

5.取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于37℃培养箱培养过夜。

XL-10-Gold化学感受态注意事项

1.感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2.加入的待转化DNA的总体积不应超过感受态细胞体积的1/10；

3.加入待转化DNA后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4.为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。