大鼠原代肾小球系膜细胞培养操作与应用机制

大鼠肾小球系膜细胞分离自肾小球组织采用机械研磨法结合不同孔径不锈钢网筛过滤后使用胶原酶消化制备而来。

肾小球是肾脏的一个重要结构，负责过滤血液中的废物和多余的水分形成尿液。系膜则是一层覆盖在肾小球表面的纤维状组织，起到支持和连接的作用。

肾小球系膜细胞的主要作用有：

①收缩作用，入球小动脉和出球动脉的收缩作用受系膜细胞的调节，以影响毛细血管袢的内压和滤过率；

②支持作用，它填充于毛细血管袢之间，支持毛细血管的位置；

③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜内的大分子物质和蛋白质；

④分泌肾素，在肾缺血或免疫复合物沉积时，系膜细胞增生且分泌肾素。

大鼠肾小球系膜细胞在生物医学研究中具有重要价值。由于大鼠与人在生物学上具有较高的相似性，因此大鼠肾小球系膜细胞可以作为研究人类肾小球疾病的模型。通过对大鼠肾小球系膜细胞的研究，可以帮助科学家们更好地了解肾脏疾病的发生机制、病理变化以及药物作用机制，为治疗相关疾病提供新的思路和靶点。

在实验室中，研究人员通常会使用细胞培养技术来培养大鼠肾小球系膜细胞。首先，从大鼠体内获取肾脏组织，然后将组织切成小块，用酶进行消化，最后将细胞悬液接种到培养皿中。通过添加适当的培养基和生长因子，可以促进大鼠肾小球系膜细胞的生长和分裂。在适当的条件下，这些细胞会逐渐形成典型的“鹅卵石”状或“桑葚”状结构。

大鼠肾小球系膜细胞培养操作：

1)复苏大鼠肾小球系膜细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)大鼠肾小球系膜细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)大鼠肾小球系膜细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。