细胞传代(HepGz细胞)实验记录（细胞传代实验步骤、注意事项、概念解释）

大家好，今天给大家分享细胞传代实验过程，欢迎交流。

    当培养的细胞增殖达到一定密度后，将会出现密度抑制现象，表现为细胞的生长和分裂速度逐渐减慢，甚至停止。贴壁细胞会在培养瓶中长成致密单层 (悬浮细胞会充满整个体积的培养液)，铺满培养瓶底部，此时如果不及时进行分装再培养，即传代培养，细胞将逐渐走向衰老、死亡，将培养的细胞从一个容器以适当比率转移到其他容器中扩大培养，称为传代培养。

[实验内容1:细胞传代(HepGz细胞)

[实验器材1·1m枪头、移液器、15ml高心管、T25培养瓶起净台离心机.Co培养箱.胰酶、HepG2完全培养基、废液缸、PBS

[实验物聯1:1打开起净台,用159.酒精喷壶消毒,用医用纱布换拭,将1移液器、5以隔心管广5语养瓶、废液缸放入超净台内,打开繁外,照射消毒3 min;

2.将HepG2细胞从培养箱内取出,虽微镜下观震细胞状态、细胞密度,有

无污染;

3.细胞状态良好,细胞密度80%左右,无污染,给争传代,按培养指南

进行1传代。

4将PBS.HeG2完全培养基、腹丽放置37己水浴锅报热，

5.打开培养版用移液器吸去旧培养基弃去,何培养瓶内加入2m|PB5清洗工次，注意打入的方向,避避开细胞;

6.洗完后,办义1m|肤酶后,放37℃s1.C0,培养箱消化3min,

7.细胞消化成流沙状滑下,不定消化程度,可以在显猫境下观康,成小状，随晃动而滚动;

8.加入zm|完全培养基终止消化,用移液器将细胞收集到1~属心管离心100o rm,5min.高心完后弃上清及废液,

9.加入3m完金培养盖,快速吹匀细胞吹打六十余下,同时传代的了个T25甗加4完培,将3m细胞是圾以每瓶1~|加入培养瓶内,用8字法晃匀10标记细胞容字、代数、期月后用显微镜观察后议入培养箱。

细胞传代实验注意事项

1. 若想节省培养基，可以保留原细胞培养基，不全部倒掉，后续终止消化用原培养基。但理论上是要用新配制培养基，此操作的前提是细胞培养时间短、培养基成分及代谢废物积累不多，最重要的是经费紧张的条件下 。

2. 用枪加入PBS时，不要直接打到细胞上，要打在无细胞的瓶身侧面，防止冲掉细胞。

3. 用PBS冲洗的原因：PBS缓冲液PH值在7.2-7.4之间，是细胞最适合的PH值范围，且在酸碱微量的刺激下PH值基本不会发生变化。而培养细胞使用过的培养基PH值会发生变化，对细胞有伤害，细胞经过PBS缓冲液清洗会去除废弃的培养基，而保持细胞能在适合的PH值范围之内，良好生活，从而再换新的培养基使细胞继续增殖。

4. 若用显微镜观察，看到细胞成片状，漂着小片白色膜状物，则证明消化过度。并且消化过度会导致相当一部分细胞损伤和死亡，如果细胞团中都是死细胞，则不会贴壁。如果细胞团中仍存在有活力的细胞，就会贴壁造成局部细胞密度不均匀，该局部较快形成中央坏死细胞区。

5. 消化过度的补救措施：马上用培养基中和，吹打瓶身和细胞，收集全部的细胞到离心管中1500rpm，离心3分钟。弃上清，用完全培养基重悬，换新的培养瓶继续培养,，状态不好的细胞在培养的过程中会死亡脱落，在换液的时候可以清除掉。

6. 一般来说，0.25% 的胰酶作用于单层贴壁的细胞，需要注意的是Ca2+、Mg2+、血清、蛋白质可降低胰酶的活性，因此不含Ca2+、Mg2+，含EDTA的胰酶活性更高，胰酶对温度敏感，需在-20℃运输和保存，不能反复冻融。

7. 来回吹打瓶身上的细胞时，为避免产生过多的气泡，可不将细胞液全部打出，并控制液体流出速度。

8. 如果细胞性质紧实可以直接倒掉上清，如果细胞离心后不紧实，则只能用枪吸取上清，以免倒掉细胞。如果细胞数量较少或较珍贵，此处用的枪头不能直接扔掉，可用培养液冲洗枪头，使附着的细胞冲洗下来。2mL稀释计数不是一个固定值，需要依据细胞的数量来定，如果细胞数量较多，则也可能达到3-7mL。

9. 接种密度不是一个固定值，需要根据实验需求来制定，若短时间内需要大量细胞，则增加接种密度。若需经过周末培养，则周五接种密度就不宜过大。

10. 加入细胞至培养瓶时尽量接触到瓶身，加入培养液时尽量和细胞接触，以避免过多气泡。

11. 培养时间不固定，大多是每天观察，隔天换液。