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血清长期储存的条件和方法(以及血清成分和解冻步骤)

发布时间:2024-11-21 点击次数:194

血清储存小贴士:血清长期储存的条件和方法血清如需长期保存,则必须储存于-10℃或更低温冰箱中,建议存放于-20℃的冰箱中研究表明储存在-80℃条件下的血清在性能方面变化不大,但由于解冻时温差过大,会导致析出更多沉淀,使得背景杂乱,因此血清长期保存不建议处于-80℃条件下。

如果近期会频繁使用血清,我们建议不要在4℃条件下存放超过1个月,若一次无法用完整瓶建议分装后保存,且要避免反复冻融。另外,血清冰冻后体积会增加约10%,因此血清分装时请留意预留一定的体积空间。

血清解冻步骤:

血清解冻,切忌一步到位,根据小艾童鞋的多年细胞培养经验,建议“步步为营”——逐步解冻法:将血清从 -20℃ 放入 2-8℃ 条件先“冷静”一天,待全部溶解后再使用,后续建议分装冻存。解冻时可轻摇颠倒混匀,减少沉淀产生。

1. 高温解冻、剧烈混匀、反复冻融或室温长时间放置等可能会对产品质量产生不同程度的影响。
2. 血清若从 -20℃ 直接转入 37℃ 解冻,极易造成蛋白质凝结并出现沉淀。
3. 短期内频繁使用,可将产品置于 2-8℃,建议不超过一个月。
牛血清采血方式和成分:
(1)采血方式不同:胎牛血清:母牛怀孕3-8个月时,采用剖腹心脏密闭穿刺取血。新生牛血清、小牛血清、供体牛血清:分别是取自新生牛(小牛)、成牛的血。(2)血清成分不同:胎牛血清还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少;促细胞生长因子、促附因子、激素及其他活性物质等组分也不同于其他几类血清。

(3)用途不同:某些细胞的培养必须使用胎牛血清才行,如:干细胞、淋巴细胞、神经细胞等;而有些细胞需要小牛血清就可以,如:肿瘤细胞等。使用浓度也不同,一般在10%-15%,有特殊要求的浓度在20%。
(4)颜色不同:血清根据血红蛋白含量的不同,表现的颜色也不一样,真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂,一般表现出微红色或橘色;而新生牛(小牛)血清则表现为蜡黄色或偏黄色。
(5)澄清度和粘稠度不同:胎牛血清蛋白和脂类含量低,表现为稀薄、清淡,新生牛(小牛)血清相比更加粘稠。

不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。理论上,牛龄越小的牛血清,细胞培养效果越好。其中胎牛血清因其抗体水平含量低对后续实验结果影响小、生长因子含量水平高利于细胞增殖而应用最广。


优质的胎牛血清在细胞培养方面通常优于其他类型的血清,与新生牛和小牛血清相比,各类生长因子含量更为丰富。但是由于胎牛血清价格相对而言会更高一些,不同实验对于血清的需求也不同,因此要综合考虑各实验室、生产企业的条件与所培养细胞类型,除了以往根据经验和文献报道,必要时也可进行针对特定细胞的血清筛选试验,以筛选出更佳血清。


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