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原代培养方法有很多，常用的有组织块法和消化法。原代培养也叫初代培养，是从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养。 🧫组织块培养法 操作步骤： 1️⃣处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污。 2️⃣剪切：用眼科剪把组织切成2mm3左右的块。 3️⃣铺瓶：将剪切好的组织小块，用眼科镊或吸管送入培养瓶内，每小块间距约5mm，均匀铺在瓶底。 4️⃣轻轻翻转培养瓶，使瓶底朝上，然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞，将瓶倾斜放置在37℃温箱内；2~4h待组织小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养； 5️⃣约24h后补液，3~5d可换液，7-9d便开始有细胞从组织块周围爬出。 🧫消化培养法 操作步骤： 1️⃣处理组织：用Hanks液漂洗组织2~3次，去除血污； 2️⃣剪切：用眼科剪把组织切成2mm3左右的块。加入比组织块总量多3-5倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入培养皿中。 3️⃣消化：置于37℃温箱消化，每隔20分钟摇动一次。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 4️⃣分离：在消化过程中见消化液混浊时，吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000rpm）离心5min，收集细胞，弃上清。 5️⃣加入适量培养基重悬细胞，装入培养瓶中，补足培养基。 6️⃣培养：计数后，置于37℃,5%CO2培养箱培养。
