杭州洵和生物科技有限公司
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一． 实验目的
获取大鼠骨骼肌细胞，掌握原代取材的基本方法。 1. 探讨大鼠骨骼的结构、形态和生长发育规律; 2. 分析大鼠骨骼的生理功能及影响因素; 3. 为骨骼疾病的研究和预防提供理论依据。
二． 实验器材
常规解剖器械，固定板，10cm培养皿，5mL离心管，水浴锅，离心机，酒精缸。
三． 实验动物
大鼠.
四． 实验试剂
15%水合氯醛，DMEM不完全培养液，DMEM完全培养液，胶原酶。
五． 实验步骤
1，给大鼠注射15%水合氯醛处死。
2，在10cm皿中倒入适量低温的DMEM不完全培养液，准备好手术器械，等待大鼠死亡。
3，待大鼠死后将大鼠固定于固定板上，用酒精喷湿大鼠腹部和腿部皮肤。
4，剪开大鼠腿部皮肤，分离膜与皮肤。
5，剪下大鼠腿部肌肉并放入培养皿中。
6，在培养皿中冲洗下肌肉块洗去血液。
7，将冲洗好的肌肉夹至5mL离心管中，用剪刀剪碎。
8，在离心管中加入2倍于组织块体积的胶原酶，然后放入水浴锅消化60min。
9，待肌肉消化好后用等体积的DMEM完全培养液终止消化，并将消化好的组织块吹散，然后静置待大的组织块沉淀。
10，待组织块沉淀后吸取上清至另一5mL离心管，再往组织块中加入数毫升DMEM培养液吹散组织块，静置待大的组织块沉淀。
11，将转移了上清液的离心管放入离心机离心，1200r/min,3min。
12，将离心得到的细胞接种至加入了DMEM完全培养液的10cm皿中，放入培养箱培养，第二天视贴壁情况进行换液。
